HEPES中文全稱4-羥乙基哌嗪乙磺酸，CAS為7365-45-9，HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2，hepes緩沖液的主要成分是羥乙基哌嗪乙硫磺酸，HEPES是一種兩性緩沖液,溶于水，不與金屬離子形成穩(wěn)定的配合物，其在pH7.2-7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力。多用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA 提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。

應(yīng)用于多種生物化學(xué)反應(yīng)：

1、 HEPES常用于各種類型生物體的細(xì)胞培養(yǎng)基中用作緩沖試劑, 細(xì)胞-細(xì)胞黏附，細(xì)胞短期聚集培養(yǎng)，清洗組織、細(xì)胞所用緩沖液；

2、 在蛋白質(zhì)研究中，PIPES 常用作陽離子交換色譜法中結(jié)合緩沖液的組分和洗脫液；

3、 在DNA研究中，PIPES用作磷酸鈣和DNA沉淀物形成體系的緩沖液，AFM以及電穿孔實(shí)驗(yàn)中的緩沖液。

4、 另外，HEPES對DNA和限制酶之間的反應(yīng)有一定干擾，也不適合用于Lowry氏法測定蛋白質(zhì)含量。

5、 HEPES 緩沖液常用于細(xì)胞器和極易變性的、對pH敏感的蛋白質(zhì)和酶的研究工作，以及生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。

6、 分離與分析RNA核組分的反應(yīng)緩沖液、預(yù)雜交緩沖液、雜交緩沖液；用于RNA與T4RNA。分子生物學(xué)級用于用T4RNA連接酶進(jìn)行RNA3'-末端標(biāo)記，分離與分析核RNA之反應(yīng)緩沖液組分、預(yù)雜交緩沖液緩和雜交緩沖液成分。

HEPES相關(guān)問題

1. 大多數(shù)細(xì)胞所需pH在7.2-7.4,但細(xì)胞培養(yǎng)合適pH值隨培養(yǎng)的細(xì)胞種類不同而不同，成纖維細(xì)胞喜歡較高pH(7.4-7.7)，而傳代轉(zhuǎn)化細(xì)胞系則需要偏酸pH (7.0-7.4)，由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉(NaHCO3)與CO2體系進(jìn)行緩沖,氣相中的CO2濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設(shè)定在5%培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為1.97g/L；如果CO2濃度維持在10%培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為3.95g/L。細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋不

應(yīng)擰得太緊，以保證氣體交換；

2. 利用HCO3和CO2緩沖對的培養(yǎng)液pH值不穩(wěn)定，儲存一定時(shí)間后容易偏堿。如果培養(yǎng)液的PH變化太快，就可以在培養(yǎng)液中加HEPES緩沖液至10---25mM的終濃度；

3. HEPES是一種兩性緩沖液，大多用于氧化磷酸化、無菌環(huán)境的蛋白質(zhì)合成、光合磷酸化、CO2固定等生物學(xué)研究中；HEPES對金屬離子酶作用底物無影響，適用于透射電子顯微技術(shù)（TEM）中；在細(xì)胞培養(yǎng)基中，優(yōu)點(diǎn)是在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的PH值，HEPES（25mM）可以作為碳酸氫鹽緩沖液的替代品，或作為碳酸氫鹽緩沖液的添加物（10-15mM），以解除需要高濃度CO2培養(yǎng)環(huán)境的限制，溶解的CO2與碳酸氫鹽對良好的細(xì)胞生長也是很重要的。