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HEPES緩沖劑多種生物化學反應的橋梁

2022-01-06 10:31:09  1645次瀏覽 次瀏覽
價 格:面議

HEPES中文全稱4-羥乙基哌嗪乙磺酸,CAS為7365-45-9,HEPES常用于生物緩沖劑,pH值緩沖范圍:6.8-8.2,hepes緩沖液的主要成分是羥乙基哌嗪乙硫磺酸,HEPES是一種兩性緩沖液,溶于水,不與金屬離子形成穩(wěn)定的配合物,其在pH7.2-7.4范圍內具有較好的緩沖能力。多用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA 提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。

應用于多種生物化學反應:

1、 HEPES常用于各種類型生物體的細胞培養(yǎng)基中用作緩沖試劑, 細胞-細胞黏附,細胞短期聚集培養(yǎng),清洗組織、細胞所用緩沖液;

2、 在蛋白質研究中,PIPES 常用作陽離子交換色譜法中結合緩沖液的組分和洗脫液;

3、 在DNA研究中,PIPES用作磷酸鈣和DNA沉淀物形成體系的緩沖液,AFM以及電穿孔實驗中的緩沖液。

4、 另外,HEPES對DNA和限制酶之間的反應有一定干擾,也不適合用于Lowry氏法測定蛋白質含量。

5、 HEPES 緩沖液常用于細胞器和極易變性的、對pH敏感的蛋白質和酶的研究工作,以及生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。

6、 分離與分析RNA核組分的反應緩沖液、預雜交緩沖液、雜交緩沖液;用于RNA與T4RNA。分子生物學級用于用T4RNA連接酶進行RNA3'-末端標記,分離與分析核RNA之反應緩沖液組分、預雜交緩沖液緩和雜交緩沖液成分。

HEPES相關問題

1. 大多數細胞所需pH在7.2-7.4,但細胞培養(yǎng)合適pH值隨培養(yǎng)的細胞種類不同而不同,成纖維細胞喜歡較高pH(7.4-7.7),而傳代轉化細胞系則需要偏酸pH (7.0-7.4),由于多數培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉(NaHCO3)與CO2體系進行緩沖,氣相中的CO2濃度應與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設定在5%培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為1.97g/L;如果CO2濃度維持在10%培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為3.95g/L。細胞培養(yǎng)瓶蓋不

應擰得太緊,以保證氣體交換;

2. 利用HCO3和CO2緩沖對的培養(yǎng)液pH值不穩(wěn)定,儲存一定時間后容易偏堿。如果培養(yǎng)液的PH變化太快,就可以在培養(yǎng)液中加HEPES緩沖液至10---25mM的終濃度;

3. HEPES是一種兩性緩沖液,大多用于氧化磷酸化、無菌環(huán)境的蛋白質合成、光合磷酸化、CO2固定等生物學研究中;HEPES對金屬離子酶作用底物無影響,適用于透射電子顯微技術(TEM)中;在細胞培養(yǎng)基中,優(yōu)點是在開放式培養(yǎng)或細胞觀察時能維持較恒定的PH值,HEPES(25mM)可以作為碳酸氫鹽緩沖液的替代品,或作為碳酸氫鹽緩沖液的添加物(10-15mM),以解除需要高濃度CO2培養(yǎng)環(huán)境的限制,溶解的CO2與碳酸氫鹽對良好的細胞生長也是很重要的。

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