電場(chǎng)強(qiáng)度(電勢(shì)梯度Electric field intensity)是指每厘米的電位降(電位差或電位梯度).電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)電泳速度起著正比作用,電場(chǎng)強(qiáng)度越高,帶電顆粒移動(dòng)速度越快。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要,電泳可分為兩種:一種是高壓電泳,所用電壓在500~1000V或更高.由于電壓高,電泳時(shí)間短(有的樣品需數(shù)分鐘),適用于低分子化合物的分離,如氨基酸,無(wú)機(jī)離子,包括部分聚焦電泳分離及序列電泳的分離等。因電壓高,產(chǎn)熱量大,必須裝有冷卻裝置,否則熱量可引起蛋白質(zhì)等物質(zhì)的變性而不能分離,還因發(fā)熱引起緩沖液中水分蒸發(fā)過(guò)多,使支持物(濾紙,薄膜或凝膠等)上離子強(qiáng)度增加,以及引起虹吸現(xiàn)象(電泳槽內(nèi)液被吸到支持物上)等,都會(huì)影響物質(zhì)的分離.另一種為常壓電泳,產(chǎn)熱量小,室溫在10~25℃分離蛋白質(zhì)標(biāo)本是不被破壞的,無(wú)需冷卻裝置,一般分離時(shí)間長(zhǎng)。
電泳基本原理:生物大分子如蛋白質(zhì),核酸,多糖等大多都有陽(yáng)離子和陰離子基團(tuán),稱(chēng)為兩性離子。常以顆粒分散在溶液中,它們的靜電荷取決于介質(zhì)的H+濃度或與其他大分子的相互作用。在電場(chǎng)中,帶電顆粒向陰極或陽(yáng)極遷移,遷移的方向取決于它們帶電的符號(hào),這種遷移現(xiàn)象即所謂電泳。
等電聚焦電泳 是將兩性電解質(zhì)加入盛有pH梯度緩沖液的電泳槽中,當(dāng)其處在低于其本身等電點(diǎn)的環(huán)境中則帶正電荷,向負(fù)極移動(dòng);若其處在高于其本身等電點(diǎn)的環(huán)境中,則帶負(fù)電向正極移動(dòng)。當(dāng)泳動(dòng)到其自身特有的等電點(diǎn)時(shí),其凈電荷為零,泳動(dòng)速度下降到零,具有不同等電點(diǎn)的物質(zhì)后聚焦在各自等電點(diǎn)位置,形成一個(gè)個(gè)清晰的區(qū)帶,分辨率。
電泳涂裝前表面處理的目的主要是:清除涂膜與涂件表面的障礙,排除影響二者結(jié)合的因素如油污,銹漬,氧化皮及其它雜質(zhì),為電泳涂裝提供如下良好條件: 導(dǎo)電良好,平整度高的表面。 有一個(gè)均勻,細(xì)致,膜厚1~3μm,導(dǎo)電仍良好的保護(hù)膜(磷化膜)該膜不僅可以防止預(yù)涂件在電沉積前不返銹,而且可以提高涂膜的附著力及其質(zhì)量。 預(yù)涂件表面潔凈度,。不污染電泳槽液。 涂件表面仍濕潤(rùn),以利于電沉積。