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    2025-04-16 05:13:02 4551次瀏覽
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    移動界面電泳

    是將被分離的離子(如陰離子)混合物置于電泳槽的一端(如負極),在電泳開始前,樣品與載體電解質有清晰的界面。電泳開始后,帶電粒子向另一極(正極)移動,泳動速度快的離子走在前面,其他離子依電極速度快慢順序排列,形成不同的區(qū)帶。只有個區(qū)帶的界面是清晰的,達到完全分離,其中含有電泳速度快的離子,其他大部分區(qū)帶重疊。

    等速電泳

    是在樣品中加有離子(其遷移率比所有被分離離子的大)和終末離子(其遷移率比所有被分離離子的小),樣品加在離子和終末離子之間,在外電場作用下,各離子進行移動,經過一段時間電泳后,達到完全分離。被分離的各離子的區(qū)帶按遷移率大小依序排列在離子與終末離子的區(qū)帶之間。由于沒有加入適當?shù)闹С蛛娊赓|來載帶電流,所得到的區(qū)帶是相互連接的(圖d),且因“自身校正”效應,界面是清晰的,這是與區(qū)帶電泳不同之處。

    電泳基本原理:生物大分子如蛋白質,核酸,多糖等大多都有陽離子和陰離子基團,稱為兩性離子。常以顆粒分散在溶液中,它們的靜電荷取決于介質的H+濃度或與其他大分子的相互作用。在電場中,帶電顆粒向陰極或陽極遷移,遷移的方向取決于它們帶電的符號,這種遷移現(xiàn)象即所謂電泳。

    電場強度(電勢梯度Electric field intensity)是指每厘米的電位降(電位差或電位梯度).電場強度對電泳速度起著正比作用,電場強度越高,帶電顆粒移動速度越快。根據實驗的需要,電泳可分為兩種:一種是高壓電泳,所用電壓在500~1000V或更高.由于電壓高,電泳時間短(有的樣品需數(shù)分鐘),適用于低分子化合物的分離,如氨基酸,無機離子,包括部分聚焦電泳分離及序列電泳的分離等。因電壓高,產熱量大,必須裝有冷卻裝置,否則熱量可引起蛋白質等物質的變性而不能分離,還因發(fā)熱引起緩沖液中水分蒸發(fā)過多,使支持物(濾紙,薄膜或凝膠等)上離子強度增加,以及引起虹吸現(xiàn)象(電泳槽內液被吸到支持物上)等,都會影響物質的分離.另一種為常壓電泳,產熱量小,室溫在10~25℃分離蛋白質標本是不被破壞的,無需冷卻裝置,一般分離時間長。

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